抗体分析的不同方法
糖基化是蛋白质上一种复杂的异质修饰,在修饰位点上具有宏观和微观不均一性;在糖链结构上具有序列结构、链接结构、异头异构及立体构型等多个维度。
这些修饰糖链以位点和结构特异的方式调控蛋白质的结构和功能(如药物安全性、稳定性和有效性)。修饰糖链位点尤其是结构分析是一个巨大的挑战。
当使用质谱分析方法时,通过酶切底物(简化底物)减少聚糖的异质性,在亚基水平上进行表征,是糖链位点和结构特异分析有效的方式。
a~d单糖序列结构的准确鉴定和明确区分
相比较目前常见的完整质量和肽图谱等分析方法,亚基水平上的分析方法具有如下优势:
优势
1.数据的处理更快速、实验操作更简单、获得的信息更完整;
2.对高通量、自动化的应用场景更友好,并支持肽图分析,例如克隆筛选、工艺开发和验证以及稳定性研究;
3.可以通过使用SmartEnzymes™系列酶将抗体分解成更小的片段,提高分辨率、提升修饰鉴定水平,不仅能够更好地识别修饰,而且能够将它们定位到蛋白质上的单个结构域;
4.糖链分析配备有完备的常见物种结构特异糖链数据库,基于串级质谱位点决定性碎片离子对糖基化位点进行明确定位,基于糖链结构诊断性碎片离子对序列和链接异构体进行明确区分,得到氨基酸序列、糖基化位点、糖链单糖组成,尤其是序列结构以及链接结构的全面信息;
5.适用于受控环境中的批次放行方法。
FabRICATOR酶消化IgG过程演示
FabRICATOR酶消化IgG后的亚基分析
案例分析
亚基水平上:特定亚基上的修饰信息
同时获得的质量测定和PTMs分析数据